凝胶柱色谱也称为凝胶过滤色谱、分子筛色谱、凝胶渗透色谱(GPC)、排阻色谱。它主要是利用凝胶网状结构的分子筛作用,根据被分离物分子大小不同进行分离。具有的优点有分离条件温和,适用于不稳定的分子; 样品回收率高,几乎可达100%; 重复性高; 操作的时间相对较短,所需要的设备简单、经济。凝胶柱色谱的支持物是多孔凝胶,当不同分子流经凝胶色谱柱时,每个分子不仅是向下移动,而且还在做无定向的扩散运动。分子直径比凝胶孔径大的蛋白质分子,不能进入凝胶颗粒的微孔,只能通过凝胶颗粒之间的空隙,这样的分子是随溶剂一起移动而分子直径比凝胶孔径小的蛋白质分子,能够自由进人凝胶颗的,故此最先流出柱外。
凝胶色谱仪的工作原理是什么?
样品通过凝胶柱时,按分子的流体力学体积不同进行分离,大分子先流出。柱后流出物浓度随保留值的变化,高聚物的平均分子量及其分布,根据所用凝胶的性质,可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。只依据尺寸大小分离,大组分最先被洗提出色谱固定相是多孔性凝胶,只有直径小于孔径的组分可以进入凝胶孔道。大组分不能进入凝胶孔洞而被排阻,只能沿着凝胶粒子之间的空隙通过,因而最大的组分最先被洗提出来。